Fundamento:
La determinación rápida de Hb se basa en el hecho de que una gota con una concentración de Hb superior a la permitida, para poder efectuar una donación, tiene una densidad mayor a la de una solución de sulfato de cobre previamente preparada. Por lo que, en estas circunstancias, una gota de la sangre investigada cae libremente a través de la solución de sulfato de cobre.
Material:
Material de extracción de sangre capilar.
Un vaso de precipitado de 50cc.
Reactivos:
Solución de sulfato de cobre a una densidad de 1,052g/dl.
Muestra:
Sangre capilar
Procedimiento:
- Disponer la solución de sulfato de cobre en un vaso de precipitados de 50 ml.
- Recoger una gota de de la sangre problema.
- Dejar caer la gota sobre la solución de sulfato de cobre.
Lectura de resultados:
Si la gota de la sangre problema cae al fondo significa que es más densa que la solución por lo tanto la concentración de hemoglobina es la correcta. Si por el contrario se queda en la superficie suspendida la gota de sangre tiene una densidad menos que la solución y por lo tanto la concentración de hemoglobina es menor y no puede donar sangre.
viernes, 12 de junio de 2015
Prueba cruzada mayor
Fundamento:
Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes de donante, primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por último frente al suero de Coombs. Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.
Material:
- Tubos de hemólisis
- Centrífuga
- Baño de agua
- Pipeta Pasteur
- Gradilla
- Reloj
Reactivos:
Solución salina fisiológica
Albúmina bovina al 30%.
Suero de Coombs.
Muestra:
Suero del receltor, obtenido de sangre coagulada y libre de hemólisis.
Hematíes de donante, previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica.
Procedimiento:
- En un tubo de hemólisis depositamos una gota de la suspensión de hematíes del donante y 2 gotas de suero del receptor.
- Mezclamos suavemente, y dejamos a temperatura ambiente durante 2-3 min.
- Centrifugamos a 3.500 rpm durante 30 segundos.
- Leemos el resultado obtenido en medio salino.
- Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina bovina al 30%.
- Mezclamos bien e incubamos a 37ºC durante 30 min.
- Leer el resultado obtenido en medio albuminoso.
- Lavamos tre veces los hematíes con solución salina.
- Añadimos al tubo de suero de Coombs.
- Centrifugamos a 1000 rpm durante 2 minutos.
Lectura de resultados:
Si no sale botón o no hay aglutinación las sangres con compatibles.
Por el contrario si aparece botón o aglutinación no son compatibles y paramos el procedimento.
Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes de donante, primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por último frente al suero de Coombs. Con este último paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.
Material:
- Tubos de hemólisis
- Centrífuga
- Baño de agua
- Pipeta Pasteur
- Gradilla
- Reloj
Reactivos:
Solución salina fisiológica
Albúmina bovina al 30%.
Suero de Coombs.
Muestra:
Suero del receltor, obtenido de sangre coagulada y libre de hemólisis.
Hematíes de donante, previamente lavados tres veces en solución salina fisiológica.
Procedimiento:
- En un tubo de hemólisis depositamos una gota de la suspensión de hematíes del donante y 2 gotas de suero del receptor.
- Mezclamos suavemente, y dejamos a temperatura ambiente durante 2-3 min.
- Centrifugamos a 3.500 rpm durante 30 segundos.
- Leemos el resultado obtenido en medio salino.
- Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina bovina al 30%.
- Mezclamos bien e incubamos a 37ºC durante 30 min.
- Leer el resultado obtenido en medio albuminoso.
- Lavamos tre veces los hematíes con solución salina.
- Añadimos al tubo de suero de Coombs.
- Centrifugamos a 1000 rpm durante 2 minutos.
Lectura de resultados:
Si no sale botón o no hay aglutinación las sangres con compatibles.
Por el contrario si aparece botón o aglutinación no son compatibles y paramos el procedimento.
Dterminación de un Du
Fundamento:
El Du es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh. Por ello debemos sensivilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anicuerpos anti- D a sus receptores de membrana, y en la segunda fase darán lugar a la alglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.
Material:
- Tubos de ensayo
- Centrífuga
- Pipetas Pasteur
- Gradilla
- Baño de agua
- Reloj
Muestra:
Hematíes de la sangre problema previamente lavados tres veces en solución salina y suspensión al 5%.
Reactivos:
Suero anti-D humano
Suero de Coombs
Solución salina fisiológica
Procedimiento:
- En un tubo de ensayo colocamos una gota de suero anti-D y una gota de suspensión de hematíes al 5%.
- Mezclamos suavemente e incubamos a 37 ºC durante 30-45 min.
- Después de incubar, lavamos los hematíes tres veces.
- Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs, y mezclamos .
- Centrifugamos el tubo a 1000 rpm durante 1 min.
Lectura de resultados:
Apreciamos la aparición o no de aglutinación. mediante golpes suaves en el fondo del tubo.
Para evitar los falsos positivos debido a una sensibilización previa de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema.
El Du es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh. Por ello debemos sensivilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anicuerpos anti- D a sus receptores de membrana, y en la segunda fase darán lugar a la alglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.
Material:
- Tubos de ensayo
- Centrífuga
- Pipetas Pasteur
- Gradilla
- Baño de agua
- Reloj
Muestra:
Hematíes de la sangre problema previamente lavados tres veces en solución salina y suspensión al 5%.
Reactivos:
Suero anti-D humano
Suero de Coombs
Solución salina fisiológica
Procedimiento:
- En un tubo de ensayo colocamos una gota de suero anti-D y una gota de suspensión de hematíes al 5%.
- Mezclamos suavemente e incubamos a 37 ºC durante 30-45 min.
- Después de incubar, lavamos los hematíes tres veces.
- Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs, y mezclamos .
- Centrifugamos el tubo a 1000 rpm durante 1 min.
Lectura de resultados:
Apreciamos la aparición o no de aglutinación. mediante golpes suaves en el fondo del tubo.
Para evitar los falsos positivos debido a una sensibilización previa de los hematíes in vivo, debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema.
Determinación del fenotipo y genotipo del sistema Rh
Fundamento:
Podemos investigar el genotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh. La exitencia o no de estos antígenos en la superficie de los hematíes se detecta por una reacción de aglutinación.
Material:
- Tubos de ensayo
- Centrífuga
- Rotulador de vidrio
- Pipetas Pasteur
- Gradilla
Reactivos:
Suero anti-D
suero anti-E
Suero anti-C
Suero anti-e
suero anti-c
Solución salina fisiológica
Muestra:
Suspensión de hematíes lavados al 5% en solución salina fisiológica.
Procedimiento:
- Procedemos al lavado de hematíes y preparar la suspensión al 5%.
- Rotulamos los tubos de centrífuga, cada uno con la letra D,C,E,c y e.
- En cada tubo añadimos una gota del antisuero correspondiente y una gota de la suspensión de hematíes. Homogeneizamos suavemente.
- Centrifugamos todos los tubos durante un minuto a 1000 rpm.
Lectura de resultados:
dCe/dce (r·/r¨)
dCE/dce (r¨/r·¨)
Podemos investigar el genotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh. La exitencia o no de estos antígenos en la superficie de los hematíes se detecta por una reacción de aglutinación.
Material:
- Tubos de ensayo
- Centrífuga
- Rotulador de vidrio
- Pipetas Pasteur
- Gradilla
Reactivos:
Suero anti-D
suero anti-E
Suero anti-C
Suero anti-e
suero anti-c
Solución salina fisiológica
Muestra:
Suspensión de hematíes lavados al 5% en solución salina fisiológica.
Procedimiento:
- Procedemos al lavado de hematíes y preparar la suspensión al 5%.
- Rotulamos los tubos de centrífuga, cada uno con la letra D,C,E,c y e.
- En cada tubo añadimos una gota del antisuero correspondiente y una gota de la suspensión de hematíes. Homogeneizamos suavemente.
- Centrifugamos todos los tubos durante un minuto a 1000 rpm.
Lectura de resultados:
dCe/dce (r·/r¨)
dCE/dce (r¨/r·¨)
miércoles, 10 de junio de 2015
La gota gruesa
INTRODUCCIÓN
El paludismo es una enfermedad producida por parásitos del género Plasmodium (causante de la malaria).
De estos parásitos palúdicos existen cuatro especies. Éstos, en algunas etapas de su ciclo vital,se encuentran en la sangre periférica en la que pueden observarse infectando a los hematíes, o también, en el exterior de las células.
PARA REALIZAR LA PRÁCTICA
FUNDAMENTO
Para el estudio microscópico de muestras sanguíneas que puedan contener parásitos palúdicos se hace una preparación en forma de extensión fina y otra de gota gruesa en el mismo porta.
En la extensión fina se debe prestar atención a los hematíes infectados y a los parásitos que hay dentro de ellos para establecer o confirmar un diagnóstico de paludismo.
En la gota gruesa, los parásitos suelen ser más abundantes y compactos que en la extensión fina. Los hematíes están lisados, por lo que el diagnóstico de paludismo se basa en el aspecto de los parásitos que puedan encontrarse.
MATERIALES- Capilar heparinizado, si la muestra es sangre capilar, o no heparinizado, si la muestra es sangre venosa anticoagulada.
- Pipeta Pasteur (para la muestra de sangre venosa)
- 2 portaobjetos
- Vaso de precipitado
- Reactivos: Metanol, Agua destilada y una solución de Giemsa al 3%
MUESTRA
Sangre capilar o venosa anticoagulada.
PROCEDIMIENTO.
-Hacemos la punción cutánea o extraemos la muestra de sangre de la bolsa de hemodonación.
-Una vez tengamos la muestra de sangre que deseamos, situamos una pequeña gota de sangre en el centro del portaobjetos y realizamos la extensión sanguínea.
-Colocamos tres gotas a la derecha de la extensión sanguínea. Estas tres gotas deben formar un triángulo cuya base va dirigida hacia la extensión.
-Con la esquina del porta extensor, unimos las tres gotas de sangre con movimientos rapidos y circulares, hasta que nos quede una capa gruesa y uniforme.
Al mover de esta forma la sangre conseguimos la desfibrinación de la misma.
-Dejamos secar la muestra en posición horizontal
-Fijamos la extensión fina sumergiendo la zona del porta donde tenemos la extensión en un vaso de precipitado con metanol.
-Dejamos secar 24 horas la muestra en posición horizontal, tiempo necesario para que la gota gruesa se seque.
-En una cubeta de coloración vertemos la solución Giemsa al 3%
-Sumergimos la muestra en la solución durante 30 - 45 minutos. Debe cubrirse toda la muestra (extensión y gota gruesa)
-En un vaso de precipitado con agua destilada, transcurridos los 30-45 minutos de tinción, sumergimos el porta hasta aclarar la muestra y retirar el exceso de la tinción.
-Dejamos secar la muestra en posición vertical.
-Una vez seca la muestra, la colocamos y observamos en el microscopio.
LECTURA DE LOS RESULTADOS
En la práctica realizada en clase, no hemos podido ver parásitos palúdicos, ya que la sangre que estudiamos es sangre de gente sana.
Un error cometido es el exceso de tinción en la muestra.
Al mover de esta forma la sangre conseguimos la desfibrinación de la misma.
-Dejamos secar la muestra en posición horizontal
-Fijamos la extensión fina sumergiendo la zona del porta donde tenemos la extensión en un vaso de precipitado con metanol.
-Dejamos secar 24 horas la muestra en posición horizontal, tiempo necesario para que la gota gruesa se seque.
-En una cubeta de coloración vertemos la solución Giemsa al 3%
-Sumergimos la muestra en la solución durante 30 - 45 minutos. Debe cubrirse toda la muestra (extensión y gota gruesa)
-En un vaso de precipitado con agua destilada, transcurridos los 30-45 minutos de tinción, sumergimos el porta hasta aclarar la muestra y retirar el exceso de la tinción.
-Dejamos secar la muestra en posición vertical.
-Una vez seca la muestra, la colocamos y observamos en el microscopio.
LECTURA DE LOS RESULTADOS
En la práctica realizada en clase, no hemos podido ver parásitos palúdicos, ya que la sangre que estudiamos es sangre de gente sana.
Un error cometido es el exceso de tinción en la muestra.
Determinación del Rh en tubo
Fundamento:
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-B.
Material:
-Tubo de ensayo
- Centrífuga
-Pipeta Pasteur
-Rotulador
Muestra:
Sangre venosa
Reactivos:
-Anti-D
-Albúmina
Procedimiento:
- Tenemos una suspensión de hematíes de al 5%.
- Rotulamos dos tubos uno con una D y el otro con una A.
- Echamos en el tubo A una gota de anti-D y una gota de suspensión de hematíes; en el tubo B echamos una gota de albúmina y una gota de suspensión de hematíes.
- Centrifugamos los tubos en la centrífuga a 1000 rpm durante 1 minuto.
Lectura de resultados:
Si existe aglutinación en el tubo D será positivo y si lo la hay será negativo.
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-B.
Material:
-Tubo de ensayo
- Centrífuga
-Pipeta Pasteur
-Rotulador
Muestra:
Sangre venosa
Reactivos:
-Anti-D
-Albúmina
Procedimiento:
- Tenemos una suspensión de hematíes de al 5%.
- Rotulamos dos tubos uno con una D y el otro con una A.
- Echamos en el tubo A una gota de anti-D y una gota de suspensión de hematíes; en el tubo B echamos una gota de albúmina y una gota de suspensión de hematíes.
- Centrifugamos los tubos en la centrífuga a 1000 rpm durante 1 minuto.
Lectura de resultados:
Si existe aglutinación en el tubo D será positivo y si lo la hay será negativo.
Determinación de Rh en porta
Fundamento:
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-B.
Material:
-Porta
-Pipeta Pasteur
-Lámpara
- Palillos mezcladores
Reactivos:
Anti-D
Albumina
Muestra:
Sangre capilar
Procedimiento:
- Dividimos un porta en dos mitades, una la rotulamos con una letra D y la otra parte con la letra A.
- Echamos una gota de sangre en cada una de las partes.
- Echamos una gota de anti-D en la parte de la D y una gota de albúmina en la parte de la A.
- Mezclamos las dos gotas de un palillo mezclador hasta encontrar aglutinación.
Lectura de resultados:
Si aglutina la parte del anti-D, será positivo, si no aglutina será negativo. La albúmina está de control negativo y no debe aglutinar ; si lo hiciese sería una prueba inconcluyente.
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-B.
Material:
-Porta
-Pipeta Pasteur
-Lámpara
- Palillos mezcladores
Reactivos:
Anti-D
Albumina
Muestra:
Sangre capilar
Procedimiento:
- Dividimos un porta en dos mitades, una la rotulamos con una letra D y la otra parte con la letra A.
- Echamos una gota de sangre en cada una de las partes.
- Echamos una gota de anti-D en la parte de la D y una gota de albúmina en la parte de la A.
- Mezclamos las dos gotas de un palillo mezclador hasta encontrar aglutinación.
Lectura de resultados:
Si aglutina la parte del anti-D, será positivo, si no aglutina será negativo. La albúmina está de control negativo y no debe aglutinar ; si lo hiciese sería una prueba inconcluyente.
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